Frecuencia y detección molecular de Gardnerella vaginalis en una institución de tercer nivel / Frequency and molecular detection of Gardnerella vaginalis in a third level institute

Resumen Antecedentes: Los padecimientos vaginales son la razón más común para que las mujeres busquen atención médica, con una prevalencia global que oscila entre el 23 y el 29% en mujeres en edad reproductiva. La vaginosis bacteriana es una de las principales causas de estos padecimientos, y el agente etiológico más frecuentemente identificado es Gardnerella vaginalis, sin embargo su diagnóstico es difícil, ya que requiere de medios artificiales selectivos enriquecidos y diferenciales. Objetivo: Determinar la frecuencia de G. vaginalis mediante la amplificación de ácidos nucleicos empleando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en muestras cervicovaginales de pacientes que asisten a un instituto de tercer nivel. Método: Se analizaron 121 muestras cervicovaginales para la detección molecular del ARN ribosomal 16S de G. vaginalis. Resultados: G. vaginalis. se detectó en 34 muestras, de estas, 23 fueron de mujeres embarazadas y 11 de no embarazadas. Conclusión: La PCR de punto final detectó tres veces más la presencia de G. vaginalis que el medio de cultivo artificial.

Abstract Background: Vaginal conditions are the most common reason for women to seek medical care, with an overall prevalence ranging from 23 to 29% in women of reproductive age. Bacterial vaginosis is one of the main causes of these conditions, and the most frequently identified etiological agent is Gardnerella vaginalis, however, its diagnosis is difficult since it requires enriched and artificial selective culture media. Objective: To determine the frequency of G. vaginalis by nucleic acid amplification using polymerase chain reaction (PCR) in cervicovaginal samples from patients attending a third level institute. Method: One hundred twenty-one cervicovaginal samples were analyzed for molecular detection of 16S ribosomal RNA from G. vaginalis. Results: G. vaginalis was detected in 34 samples, of these, 23 were from pregnant women and 11 from non-pregnant women. Conclusion: Endpoint PCR detected three times more the presence of G. vaginalis than artificial culture medium.

Análisis molecular y filogenético del genotipo F de Chlamydia trachomatis aislados en México en 2011 / Molecular and phylogenetic analysis of the F genotype of Chlamydia trachomatis isolated in Mexico in 2011

Resumen Antecedentes: Chlamydia trachomatis es la bacteria que se detecta con mayor frecuencia en las infecciones de transmisión sexual. Se han identificado 20 genotipos de C. trachomatis mediante el gen ompA y varias genovariantes mediante el análisis de polimorfismo de un solo nucleótido (SNP). En México, el genotipo F es el más frecuente. Objetivo: Identificar la existencia de subtipos del genotipo F. Método: Se analizaron siete cepas del genotipo F de C. trachomatis aisladas en 2011, mediante secuenciación de nucleótidos y mapeo con enzimas de restricción. Resultados: El análisis de SNP mostró dos cepas con el mismo SNP en el nucleótido 288 (C288T), mientras que con enzimas de restricción se identificó una variante con diferente RFLP (polimorfismo de la longitud de fragmentos de restricción) cuando se tratan con la mezcla de enzimas HinfI y TaqI. Conclusión: En México se encuentran dos subtipos del genotipo F y solo las enzimas de restricción HinfI y TaqI pueden identificar la existencia de uno de estos genotipos F.

Abstract Background: Chlamydia trachomatis is the most frequently identified bacterium in sexually transmitted infections. Twenty C. trachomatis genotypes have been determined using the ompA gene and several genovariants by single nucleotide polymorphism (SNP) analysis. In Mexico, the F genotype is the most frequent. Objective: To identify subtypes of the F genotype. Method: Seven C. trachomatis genotype F strains isolated in 2011 were analyzed by nucleotide sequencing and restriction enzyme mapping. Results: SNP analysis showed two strains with the same SNP at nucleotide 288 (C288T), while with res-triction enzymes, a variant with different RFLP (restriction fragment length polymorphism) was identified when treated with the mixture of HinfI and TaqI enzymes. Conclusion: In Mexico, there are two subtypes of F, and only with restriction enzymes HinfI and TaqI can identify one of the genovariants of the F genotype.

PCR múltiplex para el diagnóstico de microorganismos atípicos transmitidos sexualmente / Multiplex PCR testing for the atypical microorganisms diagnosis sexually transmitted

Resumen Antecedentes: Las infecciones de transmisión sexual son un problema de salud pública mundial. El análisis rutinario incluye solo pruebas microbiológicas y serológicas para el diagnóstico de patógenos. Los microorganismos atípicos como Chlamydia trachomatis y micoplasmas no son identificados debido a los requerimientos. Además, no es incluida Gardnerella vaginalis, aunque se asocia a la vaginosis bacteriana. Objetivo: Desarrollar una PCR múltiplex para el diagnóstico de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis. Método: Se estandarizó la PCR múltiplex utilizando oligonucleótidos para C. trachomatis (gen ompA, orf6 plasmídico), Mycoplasma/Ureaplasma y G. vaginalis (genes rRNA16s). Resultados: Se estandarizaron pruebas de PCR múltiplex para los microorganismos estudiados, optimizándose las concentraciones y condiciones de las reacciones múltiplex. Se obtuvieron PCR dúplex para C. trachomatis (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella y Chlamydia/micoplasmas y tríplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma. También un cuádruplex para Chlamydia/Mycoplasma/Ureaplasma/Gardnerella. Los resultados fueron verificados por PCR e hibridación automática (HybriSpot 12) y análisis in silico. Conclusión: Se desarrollaron pruebas de PCR múltiplex con una alta sensibilidad y especificidad para la identificación de C. trachomatis, micoplasmas y G. vaginalis.

Abstract Background: Sexually transmitted infections are a global public health problem. Routine analysis includes microbiological and serological tests for the diagnosis of pathogens. Atypical microorganisms such as Chlamydia trachomatis and mycoplasmas are not determined due to the requirements for their identification. Furthermore, Gardnerella vaginalis is not included despite being associated with bacterial vaginosis. Objective: To develop a multiplex PCR to diagnose Chlamydia, mycoplasmas, and Gardnerella. Method: Standardization of multiplex PCR tests was carried out using oligonucleotides for the identification of Chlamydia (ompA gene, plasmid orf6), Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella (rRNA16s genes). Results: Multiplex PCR tests were standardized for the microorganisms studied, optimizing the concentrations and conditions of the multiplex reactions. Duplex PCR was obtained for Chlamydia (ompA, orf6), Chlamydia/Gardnerella, and Chlamydia/mycoplasmas, and triplex PCR for Chlamydia/mycoplasmas. Also, a quadruplex for Chlamydia, Mycoplasma/Ureaplasma and Gardnerella. PCR and automatic hybridization verified the results obtained (HybriSpot 12) and in silico analysis. Conclusion: Multiplex PCR tests with high sensitivity and specificity were developed to identify C. trachomatis, mycoplasmas, and G. vaginalis.

Prevalencia de la infección genital por Chlamydia trachomatis en mujeres que asisten al Instituto Nacional de Perinatología de la Ciudad de México / Prevalence of genital Chlamydia trachomatis infection in women attending in the National Institute of Perinatology from Mexico City

Resumen Introducción: La infección endocervical por Chlamydia trachomatis es considerada una de las principales causas de infertilidad en todo el mundo. Durante el embarazo puede conducir a complicaciones graves como la ruptura prematura de membranas y los partos prematuros. Objetivo: Determinar la prevalencia de infección genital por C. trachomatis en mujeres embarazadas e infértiles de la Ciudad de México. Métodos: La detección de C. trachomatis fue mediante reacción de polimerasa en cadena tiempo real (RPC-TR) con el kit comercial COBAS® TaqMan CT Test v2,0 (Roche Molecular System). Resultados: Se analizaron 2.352 muestras; 102 fueron positivas (4,3%). La prevalencia por edad mostró que las adolescentes embarazadas (15 a 19 años) fueron las de mayor riesgo de infección (10,9%, RR = 3,23 [IC 95%: 1,79-5,84]), seguido de mujeres jóvenes de 20 a 24 años, con prevalencia de 5,6% (RR = 1,65 [IC 95%: 0,82-3,34]). Discusión: Los resultados indican que la prevalencia está dentro del rango reportado en el concierto mundial. Sin embargo, las adolescentes embarazadas tuvieron mayor prevalencia que las mujeres infértiles. Conclusión: Es imperioso realizar un rastreo sistemático de infección por C. trachomatis en mujeres bajo 24 años de edad, y en mujeres embarazadas para disminuir los casos de infertilidad y las complicaciones perinatales.

Background: Endocervical infection by Chlamydia trachomatis is considered one of the leading causes of infertility worldwide. During pregnancy, it can lead to serious complications such as premature rupture of membranes and premature births. Aim: To determine the prevalence of genital infection by C. trachomatis in pregnancy and infertile women from Mexico City. Methods: The detection of C. trachomatis was performed by real-time PCR with the commercial kit COBAS® TaqMan CT Test v2.0 (Roche Molecular System). Results: We analyzed 2,352 endocervical swabs; 102 were positive (4.3%). Age prevalence showed that pregnant adolescents (15 to 19 years of age) had the highest risk of infection (10.9%, RR = 3.23 [95% IC: 1.79-5.84]), followed by young women aged 20 to 24 years, with a prevalence of 5.6% (RR = 1.65 [95% IC: 0.82-3.34]). Discussion: The results indicate that the prevalence is within the range reported worldwide. However, pregnant adolescents were those with a higher prevalence than infertile women were. Conclusion: A systematic screening of C. trachomatis infection in women younger than 24 years of age, and in pregnant women is necessary to reduce the incidence of infertility and perinatal complications.

Reporting detection of Chlamydia trachomatis DNA in tissues of neonatal death cases / Relato de detecção de DNA de Chlamydia trachomatis em tecidos de casos de óbito neonatal

OBJECTIVE: to determine whether C. trachomatis was present in neonates with infection, but without an isolated pathogen, who died during the first week of life. METHODS: early neonatal death cases whose causes of death had been previously adjudicated by the institutional mortality committee were randomly selected. End-point and real-time polymerase chain reaction of the C. trachomatis omp1 gene was used to blindly identify the presence of chlamydial DNA in the paraffinized samples of five organs (from authorized autopsies) of each of the dead neonates. Additionally, differential diagnoses were conducted by amplifying a fragment of the 16S rRNA of Mycoplasma spp. RESULTS: in five cases (35.7%), C. trachomatis DNA was found in one or more organs. Severe neonatal infection was present in three cases; one of them corresponded to genotype D of C. trachomatis. Interestingly, another case fulfilled the same criteria but had a positive polymerase chain reaction for Mycoplasma hominis, a pathogen known to produce sepsis in newborns. CONCLUSION: the use of molecular biology techniques in these cases of early infant mortality demonstrated that C. trachomatis could play a role in the development of severe infection and in early neonatal death, similarly to that observed with Mycoplasma hominis. Further study is required to determine the pathogenesis of this perinatal infection. .

OBJETIVO: determinar se a C. trachomatis está presente em neonatos com infecção, porém sem patógeno isolado, que morreram durante a primeira semana de vida. MÉTODOS: casos de óbito neonatal precoce cujas causas de óbito haviam sido anteriormente determinadas pelo Comitê de Mortalidade da instituição foram aleatoriamente selecionados. Foram utilizadas as reações em cadeia da polimerase convencional e em tempo real do gene omp1 da C. trachomatis, para identificar, às cegas, a presença de DNA de clamídia nas amostras desparafinizadas de cinco órgãos (de autópsias autorizadas) de cada um dos neonatos mortos. Além disso, foram realizados diagnósticos diferenciais por amplificação de um fragmento do rRNA 16S de Mycoplasma ssp. RESULTADOS: em cinco casos (35,7%) a presença de DNA de C. trachomatis foi detectada em um ou mais órgãos. Havia infecção neonatal grave em três casos; um deles correspondente ao genótipo D de C. trachomatis. Curiosamente, outro caso preencheu os mesmos critérios, porém possuía uma reação em cadeia da polimerase positiva para Mycoplasma hominis, um patógeno conhecido por causar sepse em recém-nascidos. CONCLUSÃO: a utilização de técnicas de biologia molecular nos casos de mortalidade infantil precoce mostrou que a C. trachomatis poderia desempenhar um papel no desenvolvimento de infecção grave e no óbito neonatal precoce semelhante ao observado com a Mycoplasma hominis. São necessários estudos adicionais para determinar a patogênese dessa infecção perinatal. .

Infección por Chlamydia trachomatis en varones y su asociación con las alteraciones ginecológicas de su compañera sexual / Chlamydia trachomatis infection in men and its association to gynecologic alterations of his sexual mate

Objective.To determinate the frequency of Chlamydia trachomatis infection in male partners of infertile couples who attend to the infertility clinic at Instituto Nacional de Perinatologia, as well as to compare the clinical data and lifestyle between C. trachomatis-inifected and uninfected men to establish a possible association with gynecological damage in their sexual female partners. Methods. An open prospective study was performed in infertile couples, whose follow up was carried out at Instituto Nacional de Perinatologia between June 2000 and April 2001. Urethral and cervical swabs were obtained from each couple and the specimens were subjected to a C. trachomatis-specific liquid-phase hibridization test (PACE-2) and routine microbiological analysis. Semen analysis were also included. A relative risk (RR) test was done to analyze variables and square chi test was used to analize clinical and gynecological data from female partners and data from semen examination. Statistical differences were considered as significant when the p value was below 0.05. Results. C. trachomatis active infection was found in 14 out of 384 urethral swabs (3.6%). No significant alterations were observed in semen samples of C. trachomatis-infected men, as compared to non-infected individuals. Microbiological analyses of semen showed a significant isolation o/Mycoplasma sp (RR = 5.87, IC95% 1.4-24.7). Eight out of fourteen female partners of C. trachomatis-infected men were also infected with C. trachomatis (RR= 10.57, IC95% 5.67-19.7), Candida albicans was other pathogen isolated from 8/14 of those women (RR = 1.89, IC95% 1.17-3.05). Gynecological and obstetrical associations found among female partners of C. trachomatis-infected men were as follows: tubal adhesions in 10/14 (RR = 1.54, IC95% 1.08-2.18), salpingitis in 2/14 (RR = 2.2), history of ectopic pregnancies in 11/14 (RR =2.94, IC95% 1.01-8.53) and abnormal pregnancy loss in 9/14 (RR = 1.5). Conclusion. A low prevalence of C. trachomatis infection was observed among male partners of infertile couples as compared with other reports, but this discrepancy could be attributable to the specimen collection and diagnostic assay used. Otherwise, this data suggests that a chronic pathogen's antigenic stimulation may result in an increased formation of tubal adhesions and/or in ectopic pregnancies among female partners of C. trachomatis-infected individuals. Thus, preventive and control measures must be introduced into men's healthcare services, through laboratory and clinical examination, since these subjects are the main reservoirs of C trachomatis.

Objetivo. Determinar la frecuencia de infección por Chlamydia trachomatis y comparar la información clínica y el estilo de vida de varones con y sin infección por este patógeno, así como su asociación con las alteraciones ginecológicas que presenta su compañera sexual en un grupo de parejas que asisten a la Clínica de Infertilidad del Instituto Nacional de Perinatologia de la Ciudad de México. Métodos. Se realizó un estudio abierto, longitudinal y prospectivo en un grupo de parejas con diagnóstico de infertilidad, que fueron tratadas en el Instituto Nacional de Perinatologia durante el periodo de junio del 2000 a abril del 2001. Se recolectaron muestras uretrales y cervicales de cada pareja para el diagnóstico de C. trachomatis mediante la prueba de hibridación en fase líquida (PACE-2). También se recolectaron muestras de semen para el análisis de espermatobioscopia y se hicieron cultivos microbiológicos de rutina a las muestras cervicales y de semen. Los datos microbiológicos, clínicos y ginecológicos de los participantes fueron comparados por %z, el análisis de tendencia para proporciones fue usado para establecer el nivel de riesgo en las variables (RR). Las diferencias fueron consideradas estadísticamente significativas si p < 0.05. Resultados. Se analizaron un total de 384 muestras uretrales de varones, 14 presentaron infección activa por C. trachomatis (3.6%), Los datos de espermatobioscopia de los individuos positivos a C. trachomatis no mostraron alteraciones significativas con respecto al de varones no infectados con esta bacteria. El análisis microbiológico del semen mostró un número de aislamientos significativos de infección por Mycoplasma sp. (RR = 5.87, IC95% 1.40-24.70). En cuanto a las muestras cervicovaginales de mujeres con compañero sexual infectado por C. trachomatis, los patógenos aislados con mayor frecuencia fueron: Candida albicans en ocho de 14 (RR = 1.89, IC95% 1.17-3.05) y C. trachomatis en ocho de 14 (RR = 10.57, IC95% 5.67-19.7). Las asociaciones ginecológicas y obstétricas de la compañera sexual de varones positivos a C. trachomatis fueron adherencias tubáricas en 10 de 14 (RR = 1.54, IC95% 1.08-2.18), salpingitis en dos de 14 (RR = 2.2), antecedentes de embarazos ectópicos en 11 de 14 casos (RR = 2.94, IC95% 1.01-8.53) y abortos previos en nueve de 14 (RR = 1.5). Conclusión. Se observó una baja prevalencia de infección por C. trachomatis en los varones de mujeres infértiles en comparación con lo reportado por otros autores, esta diferencia puede estar dada por el método de diagnóstico y la toma del producto. Estos resultados sugieren que el estímulo constante del patógeno produce un aumento de adherencias tubáricas y embarazos ectópicos en las compañeras sexuales de los varones infectados con C. trachomatis. Por lo que una evaluación diagnóstica y de laboratorio deberá ser llevada a cabo en el varón como una medida de prevención y control para la infección por este patógeno, ya que estos individuos actúan como reservónos importantes de infección.

Induction of tumor necrosis factor-alpha by cefodizime in U-937 cells

La cefodizima presenta efectos moduladores sobre la liberación de diversas citocinas. En esta investigación se determinó la actividad moduladora de este antibiótico sobre la producción del factor de necrosis tumoral (TNF) en una línea de células monocitica humana U-937. La medición de TNF se realizó mediante las pruebas de ELISA y bioensayo de citotoxicidad empleando células L-929. Los resultados mostraron que la cefodizima por si sola indujo la producción de TNF sobre las células U-937, sin embargo, la adición de LPS condujo a una disminución en la liberación de esta citocina (p<0.05). Por otro lado la combinación cefodizima-PMA tuvo un efecto sinérgico (p<0.05), sin embargo, la adición de LPS a esta combinación causó una disminución de la producción de TNF (p<0.05). Con estos resultados observamos que la cefodizima regula la producción de TNF en las células U-937, produciendo una menor concentración de TNF con la adición de LPS.

Mecanismos inespecíficos en la eliminación de Chlamydia trachomati: aspectos microbiológicos y fagocitosis / Inespecific mechanisms to eliminate Chlamydia trachomatis: fhagocytosis and microbiologic aspects

Chlamydia trachomatis es uno de los patógenos más frecuentes en las infecciones de transmisión sexual, es causante de una serie de padecimientos y está asociada a otros. Sin embargo, poco se conoce acerca de los mecanismo de evación de la respuesta inmune inespecífica, tal es el caso de fagocitosis, mediante la cual dicho microorganismo puede crecer y evadir los mecanismos de la respuesta inmune específica. Por ello es esencial tener un conocimiento sobre los mecanismos que modulan la respuesta inmune inespecífica contra C. trachomatis para el desarrollo de vacunas. El objetivo de esta revisión bibliográfica es analizar aspectos sobre fagocitosis en la infección por Chlamydia

Tumor necrosis factor in peritoneal fluid from asymptomatic infertile women

Background. Tumor necrosis factor-Ó (TNF-Ó) is a cytokine that can be found in the peritoneal fluid (PF) of patients with endometriosis and pelvic inflammatory disease (PID) as a response to inflammatory disorders and infections. The cytotoxic effect of this cytokine could be a factor participating in the pathology of various gynecological diseases, and could also be accountable for the high immunological response and demage to the tubal epithelium. The objective of this study was ato establish the presence of TNF-Ó in asymptomatic infertility and its association with various isolated bacteria. Methods. Ten milliliters of PF were collected from each of 73 patients by means of laparoscopy and cultured in synthetic medium and McCoy cells for the isolation of aerobic and anaerobic bacteria, as well as for Chlamydia trachomatis. The activity of TNF-Ó was determined by means of a bioassay using L-929 cells. Results. Forty-three parcent of the PFs showed positive TNF-Ó activity, while the laparoscopic evaluation showed that 32 patients had Fallopian tube occlusion (FTO), 7 had endometriosis, 30 had PID. and 4 had myomas and adhesions. TNF-Ó activity was found to be high in FTO patients (P<0.05). Positive cultures were found in 50.7 percent of patients; of these, 31.5 percent had PID (p< 0.05), and only 20.5 percent of positive cultures were TNF-Ó positive. Chlamydia trachomatis (16 percent) was the most frequently isolated bacteria in these patients. Conclusions. The detection of TNF-Ó could be useful in the diagnosis of active infectious and inflammatory diseases in asymptomatic infertile patients

Evaluación de la sensibilidad y especificidad de tres reactivos de inmunofluorescencia directa para el diagnóstico de Chlamydia trachomatis / Evaluation of sensitivity and specificity of three reagents of direct immunofluorescence for the diagnosis of chlamydia trachomatis

Se evaluó la sebsibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo y porcentaje de falsas positivas y negativas de tres reactivos de inmunofluorescencia directa para el diagnóstico de infecciones por Chlamydia trachomatis. Se estudiaron 150 muestras de raspados cervicovaginales y 50 muestras de líquido peritoneal de pacientes con enfermedad pélvica inflamatoria. Los reactivos en contra de la proteína principal de membrana externa presentaron mayor sensibilidad pero menor especifidad que el reactivo de inmunofluorescencia contra el lipopolisacárido de Chlamydia trachomatis

Mecanismos inmunológicos en las enfermedades infecciosas / Immunologycal mecanisms of infectious diseases

Los mecanismos de inmunidad contra las infecciones bacterianas, parasitarias y virales son extremadamente complejos y tienen como principal función la eliminación de los microorganismos patógenos. Los sistemas de defensa no específicos contra las bacterias, son proporcionados por los granulocitos, que ingieren y matan a la mayoría de los patógenos. Sin embargo, se necesita de la inmunidad específica contra bacterias encapsuladas o intracelulares y contra parásitos y virus para eliminar a éstos, lo cual requiere del desarrollo de anticuerpos a través de la inmunidad humoral y de la inmunidad celular que puede desencadenar la actividad microbicida de los macrófagos. En muchas infecciones humanas, todos los mecanismos inmunológicos (anticuerpos, complemento, linfocitos, granulocitos y macrófagos) son esenciales para desarrollar una inmunidad protectora contra muchos microorganismos patógenos